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DNA合成服务

来源: 本站原创    作者:佚名   发布时间:2015/3/31 9:52:15

   Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期,1980年,全自动的固相DNA合成仪面市后,使得快速、高效合成Oligo DNA成为可能,这极大地推动了生物工程技术的蓬勃发展。随着生物工程技术发展,人工合成Oligo DNA的需求量越来越大,已经成为分子生物学实验中最基础的试剂之一。而合成Oligo DNA的质量,将会直接影响科研人员实验计划的顺利进行。因此, 使用高质量的合成Oligo DNA制品变得尤为重要。

 

我公司合成Oligo DNA制品有如下特点。

 

1  高质量合成。使用进口试剂,合成高质量的DNA制品。

 

2  高纯度纯化。推出脱盐纯化、PAGE纯化、HPLC纯化三种级别制品,客户可根据实验需要进行选择。我们保证对每个制品都进行严格的质量管理。

 

3  完善的数据。制品包装中附有制品相关的多种数据,包括:合成的原始数据,AGCT各碱基的分布情况,分子量,OD数,nmol数等,使用方便。

DNA合成原理介绍

   现在一般都采用亚磷酰胺化学合成Oligo DNA片段,具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的,合成时从3'→5'方向进行,通常3'端的第一个碱基结合在Glass担体(Controlled Pore GlassCPG)上。Oligo DNA合成的原理基本相同,主要差别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时的不同。我公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪。

 

合成的详细过程见图1,现简要说明如下:

1 Oligo DNA合成原理图。N1代表第一个碱基,N2代表第二个碱基,依次类推。

 

第一步,三氯乙酸和预先连接在固相载体(CPG)上的第一个核苷酸反应(其活性基团处于被保护状态),脱去核苷酸5‘-羟基的保护基团DMT,获得游离的5‘-羟基;

 

第二步,活化新的碱基单体(Phosphoramidite),准备与第一个碱基进行反应;

 

第三步,合成DNA的原料(亚磷酰胺保护的核苷酸单体)与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3‘端被活化,5‘-羟基仍然被DMT保护,与溶液中游离的5‘-羟基发生缩合反应;

 

第四步,带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5‘-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在纯化时分离掉;

 

第五步,在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。(即将三价磷氧化成五价磷(重复进行Step1Step5的循环,直至合成完所需的Oligo DNA序列) 

 

常用染料和荧光修饰基团

 

染料

激发光

发射光

颜色

摩尔消光系统

BHQ淬灭基团选择

AMCA

353

422

Blue

19,000

 

6-FAM

495

520

Yellow-green

83,000

BHQ-0
λmax 495nm 
range: 430-520nm

Fluorescein

495

520

Yellow-green

83,000

BHQ-1
λmax 534nm 
range: 480-580nm

TET

521

536

Yellow-green

73,000

JOE

527

548

Yellow

71,000

HEX

536

556

Yellow

73,000

CY3

550

570

Yellow-orange

150,000

BHQ-2
λmax 579nm 
range: 550-650nm

TAMRA

544

576

Yellow-orange

90,000

ROX

576

601

Orange

82,000

Cy3.5

588

604

Orange-red

116,000

Cy5

650

670

Red

250,000

 

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